dna聚合酶的5→3外切酶活性_dna聚合酶有外切酶活性

Taq DNA聚合酶中 5'→3'外切酶活性是说从5’端开始分解DNA，那么在pcr过程中DNA不就全分解了吗？

5'→3'外切酶只作用于双链DNA的碱基配对部分，从5‘末端水解下核苷酸和寡核苷酸。被公认为在切除由紫外线照射而形成的嘧啶二聚体。对正常配对的核苷酸，它应该是不起作用的。

dna聚合酶的5→3外切酶活性_dna聚合酶有外切酶活性

dna聚合酶的5→3外切酶活性_dna聚合酶有外切酶活性

DNA半不连续合成中的冈崎片段5’端RNA引物的切除也依赖于这个酶。

DNA聚合酶具备几种活性?用途是什么?

[1]聚合作用：在引物RNA'-OH末端,以dNTP为底物,按模板DNA上的指令由DNApolⅠ逐个将核苷酸加上去,就是DNApolⅠ的聚合作用.酶的专一性主要表现为新进入的脱氧核苷酸必须与模板DNA配对时才有催化作用.dNTP进入结合位点后,可能使酶的构象发生变化,促进3'-OH与5'-PO4结合生成磷酸二酯键.若是错误的核苷酸进入结合位点,则不能与模板配对,无法改变酶的构象而被3'-5'外切酶活性位点所识别并切除之.

[2]3'→5'外切酶活性──校对作用：这种酶活性的主要功能是从3'→5'方向识别和切除不配对的DNA生长链末端的核苷酸.当反应体系中没有反应底物dNTP时,由于没有聚合作用而出现暂时的游离现象,从而被3'→5'外切酶活性所降解.如果提高反应体系的温度可以促进这种作用,这表明温度升高使DNA生长链3'末端与模板发生分离的机会更多,因而降解作用加强.当向反应体系加入dNTP,而且只加放与模板互补的上述核苷酸才会使这种外切酶活性受到抑制,并继续进行DNA的合成.由此推论,3'→5'外切酶活性的主要功能是校对作用,当加入的核苷酸与模板不互补而游离时则被3'→5'外切酶切除,以便重新在这个位置上聚合对应的核苷酸.在某些T4噬菌体突变株中DNA的真实性降低,而易发生突变,从此突变株分离得到的T4DNA聚合酶的3'→5'外切酶活性很低.相反,另外一些具有抗突变能力的T4突变株中的T4DNA聚合酶的3'→5'外切酶活性比野生型高得多,因此,其DNA真实性好,变异率低.可见,3'→5'外切酶活性对DNA真实性的维持是十分重要的.

[3]5'→3'外切酶活性──切除修复作用：5'→3'外切酶活性就是从5'→3'方向水解DNA生长链前方的DNA链,主要产生5'-脱氧核苷酸.这种酶活性只对DNA上配对部分（双链）磷酸二酯键有切割活力作用,方向是5'→3'.每次能切除10个核苷酸,而且DNA的聚合作用能5'→3'外切酶活力达10倍以上.因此,这种酶活性在DNA损伤的修复中可能起着重要作用.对冈崎片段5'末端RNA引物的去除依赖此种外切酶活性.

[4]焦磷酸解作用：DNApolⅠ的这种活性可以催化3'末端焦磷酸解DNA分子.这种作用就是无机焦磷酸分解DNA生长链,可以认为是DNA聚合作用的逆反应,而且这种水解DNA链作用需要有模板DNA的存在.（dNMP)n+XPPi←（dNMP)n-x+X(dNPPP）→DNA

[5]焦磷酸交换作用：催化dNTP末端的PPi同无机焦磷酸的交换反应.反应式为32P32Pi+dNPPP←dNP32P32P+PPi→DNA

DNA聚合酶的作用

DNA聚合酶，又称DNA依赖的DNA聚合酶，它是以亲代DNA为模板，催化底物dNTP分子聚合形成子代DNA的一类酶。DNA聚合酶的作用：聚合作用、校对作用、切除修复作用。

DNA聚合酶是一种参与DNA的酶。它主要是以模板的形式，催化脱氧核糖核苷酸的聚合。聚合后的分子将会组成模板链并再进一步参与配对。

聚合作用：在引物RNA-OH末端，以dNTP为底物，按模板DNA上的指令，即A与T，C与G的配对原则，逐步逐个、连续地将dNTP加到延伸中的DNA分子3'-OH末端，逐步合成延长中的子链DNA。这是DNA聚合酶的主要作用;

3’→5’'外切酶活性(校对作用)：这种酶活性的主要功能是从3’→5’方向识别和切除不配对的DNA生长链末端的核苷酸，3’→5’外切酶活性的主要功能是校对作用，当加入的核苷酸与模板不互补而游离时则被3’→5’外切酶切除，以便重新在这个位置上聚合对应的核苷酸，可见，3’→5’外切酶活性对DNA真实性的维持是十分重要的。以保证过程的保真性和准确性;

5’→3’外切酶活性(切除修复作用)：该活性是从5’→3’方向水解DNA延长链前方的DNA链(即只对DNA上双链处的磷酸二酯键有切割作用)，主要产生5'—脱氧核苷酸。这种酶活性在DNA损伤的修复中可能起着重要作用。

DNA聚合酶I的聚合活性&外切活性

这是说的合成的方向。聚合酶5'→3'是说的从5端到3端进行合成。因DNA的两条链是反向平行的，故在叉附近解开的DNA链，一条是5’—〉3’方向，另一条是3’—〉5’方向，两个模板极性不同。所有已知DNA聚合酶合成方向均是5’—〉3’方向，不是3’—〉5’方向。你应该看一下冈崎片段。

还有外切活性，由于DNA是不连续，是在多个位点同时。这多个位点有碱基特异性，而有些聚合酶就是靠碱基顺序识别应该在哪里结合DNA进行的。

这说明这个酶有多种催化的活性，是一种多功能酶

防止出错，可以随时进行修正。

原核生物dna聚合酶的种类及其功能

原核生物中，现已发现大肠杆菌中存在DNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ。

DNA聚合酶Ⅰ是个鉴定出来的DNA聚合酶，有3`→5`外切活性和5`→3`外切活性，功能是可以可以去除冈崎片段5`端的RNA引物，使冈崎片段间缺口消失。

DNA聚合酶Ⅱ有3`→5`外切酶活性，功能是起修复DNA的作用。

DNA聚合酶Ⅲ有3`→5`外切活性和5`→3`外切活性，且活性是DNA聚合酶Ⅰ的15倍，DNA聚合酶Ⅱ的300倍，功能是合成新链。

DNA聚合酶Ⅳ和Ⅴ功能是在DNA修复和跨损伤合成过程中发挥作用。