elisa实验流程图 elisa实验原理视频

elisa结果图标类型

4.加样.

您好，ELISA（酶联免疫吸附实验）是一种常用的免疫学检测方法，用于检测体液或组织中的特定蛋白质或抗体。ELISA的结果通常以图标的形式呈现，以便于观察和解释。

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ELISA结果图标类型通常分为以下几种：

1. 柱状图：柱状图是最常见的ELISA结果图标类型之一。它通常显示样品的吸光度值，以及标准曲线的吸光度值。这种图表可以用于比较不同样品之间的异和确定样品定蛋白质或抗体的浓度。

2. 散点图：散点图通常用于显示ELISA结果的重复性。它显示了多个样品的吸光度值，以及它们的平均值和标准。这种图表可以用于评估实验的准确性和可重复性。

3. 折线图：折线图通常用于显示ELISA结果的动态变化。它显示了样品吸光度值随时间的变化情况，可以用于评估特定蛋白质或抗体的动态变化情况。

4. 热图：热图通常用于显示大量ELISA结果数据的关系。它显示了多个样品的吸光度值，以及它们之间的相关性。这种图表可以用于评估不同样品之间的关系和确定特定蛋白质或抗体的表达模式。

elisa结一、高效、灵敏、特异的抗体；果图标类型如下:

求竞争抑制ELISA原理与实验过程。。。是竞争抑制ELISA哦！！！

elisa实验原理是在于抗原抗体之间的特异结合反应，所以任何优质的诊断试剂离不开优质的原料，如抗原抗体，酶等。抗原和抗体跟酶交连以后仍然能够保持活性和酶的催化性。

当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异性抗体。其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体愈少，因此阳性反应呈色浅于阴性反应。如抗原为高纯度的，可直接包被固相。如抗原中会有干扰物质，直接包被ELISA结果图标类型的选择取决于实验的目的和需要。不同类型的图表可以提供不同的信息，帮助研究人员更好地理解实验结果。不易成功，可采用捕获包被法，即先包被与固相抗原相应的抗体，然后加入抗原，形成固相抗原。洗涤除去抗原中的杂质，然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应。竞争法测抗体有多种模式，可将标本和酶标抗体与固相抗原竞争结合，抗HBc ELISA一般采用此法。另一种模式为将标本与抗原一起加入到固相抗体中进行竞争结合，洗涤后再加入酶标抗体，与结合在固相上的抗原反应。抗HBe的检测一般采用此法。

竞争法ELISA的标准曲线

之后，又是一轮洗涤。是添加底物并检测信号。

大多数国产试剂盒生产厂家会提供对数坐标纸，可直接手工绘制曲线；如果酶标仪带有分析软件，可由软件直接拟合曲线，并自动计算出样本的浓度值；老式的酶标仪只能打印出OD值，需要实验员自己绘制曲线并计算，下面介绍2种绘制竞争法曲线的方法，希望对大家有帮助：

1. 实验做双孔，实验结果如下表所示。

S1 0.1 4）在log-logit坐标纸上绘图。 1.725 1.679 1.702 77.0%

S2 0.4 1.313 1.338 1.3255 60.0%

S3 1.6 0.907 0.834 0.8705 39.4%

S4 6.4 0.517 0.517 0.517 23.4%

S5 25.6 0.230 0.244 0.237 10.7%

2）各标准点吸光值取均值。在表中OD均一列。

3）将S1~S5的OD均值与S0的OD均相除，为标准点的百分结合率。

6）坐标纸纵轴为百分比。即各标准吸光值的百分结合率。

7）曲线个数值点是（0.1，77.0%）。则在横轴左起点的1处向上至70~80之间，由70向上7个小格处。

8）曲线第二个数值点是（0.4，60.0%）。则在横轴左起个4，向上至60的位置。

9）曲线第三个数值点是（1.6，39.4%）。则在横轴左起第二个1至2之间，由第二个1向右6个小格。再向上至30~40之间，由30向上9个半小格处。

11）曲线第四个数值点是（25.6，10.7%）。则在横轴左起第三个2至3之间，这里2与3之间分为10小格，则每个小格是1。所以由第三个2向右5个半小格。再向上至10~20之间，由10向上约半小格处。

12)画一条通过各点的直线。要求尽可能多的点在线上，同时剩余的点均匀分布在直线的两边。

13）样品也同样由吸光值计算百分结合率，再从纵轴上的相应结合率找到直线上的点，此点对应的横坐标浓度即为样品的浓度。无须换算。

如何收集细胞上清做elisa

一、在对数坐标纸上手工绘制曲线（Log-logit双对数标准曲线）

是培养基，但也有细胞分泌的可溶性使用EXCEL做表就行了。先建立一个EXCEL表格，行为项目名称，行1：检测日期，行2为吸光度检测结果，行3为靶值-3S，行4为靶值-2S，行5为靶值，行6为靶值+2S，行7为靶值+3S。的蛋白。所以一般大家都是需要离心的，去掉一些大分子的杂质之后再做elisa的。 elisa检测细胞上清液总细胞因子的处理实验步骤： 1、取细胞培养上清液500ul； 2、4度，6000rpm离心5－10min； 3、取上清。是细胞分泌的蛋白的话，直接在培养皿中铺入一定量的细胞，培养3天，细胞达到80-90%时，收取细胞培养上清液，离心去除沉淀，取上清测定浓度，用于ELISA检测。对照组为新鲜培养液。

ELISA试剂盒样本处理方法，具体有哪些步骤

二、稳定的重复性和可靠性；

以下是样本处理的具体方法，感兴趣的客户可以了解一下！

次新实验的话请教一下做过类似实验的人，对于不常做的实验做一份详尽的试验流程图做时贴在试验台前，需要特别加以注意的地方要特别标注，可以随时参照。

1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根物酶的（HRP）活性。

作步骤

1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在、第二孔中分别加标准品100μl，然后在、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为120ng/L，80ng/L ，40ng/L，20ng/L，10ng/L）。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：作同3。

ELISA的方法有哪些

ELISA实验所有方法的缺点很明显：

1、重复性不好；

3、不论仪器和手工作，干扰因素较多。影响的是温度和时间。

1、直接法（direct ELISA）

将抗原直接固定在固直接ELISA法进行初步效价的滴定：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。相载体上，参加酶符号的一级抗体，即可测定抗原总量，此一级抗体的特异性非常重要。

缺陷：实验中的一抗都得用酶符号，但不是每种抗体都适合做符号，费用相对进步。

2.间接法（indirect ELISA）

此测定办法与直接法相似，不一样在于一级抗体没有酶符号，改用酶符号的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。

优势：二抗能够加强信号，并且有多种挑选能做不一样的测定剖析。不加酶符号的一级抗体则能保存它最多的免疫反响性。

缺陷：交互反响发作的机率较高。

3.双抗体夹心法（sandwich E酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，简写ELISA）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。LISA）

被检测的抗原包被在两个抗体之间，其间一个抗体将抗原固定于固相载体上，即捕捉抗体。另一个则是检测抗体，此抗体可用酶符号后直接测定抗原的量；或不符号，再透过酶符号的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体有必要当心选择，才可防止交互反响或竞争一样的抗原联系部位。

优势：高活络、高专一性，抗原无须事前纯化。

缺陷：抗原必定得具有两个以上的抗体联系部位。

4.竞争法（competitive ELISA）

样本里的抗原（自在抗原）和纯化并固定在固相载体上的抗原（固定抗原）一同竞争一样的抗体，当样品里的自在抗原越多，就能够联系越多的抗体，而固定抗原就只能联系到较少的抗体，反之亦然。经清洁过程，洗去自在抗原和抗体的复合物，只留下固定抗原和抗体的复合物，拿来与只要固定抗原的对照组成果相比拟，依据呈别就可计算出样品里的抗原含量。

优势：可适用比拟不纯的样本，并且数据再现性很高。

缺陷：全体的敏感性和专一性都较。

Elisa方法测定植物激素含量实验步骤中有三次洗板,请说出每次洗涤洗去的是什么

2、收自身抗体、嗜异性抗体等干扰，易出现阳性；

ELISA，一般包含两个或以上的孵育步骤，中5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。间以洗涤隔开。

ELISA通常在96孔板中开展，其上包被了结合抗原或抗体。

在封闭步骤后，包被后的平板首先与一抗或抗原孵育。

随后通过一些洗涤步骤去除未结合（低亲和力）的抗原-抗体复合物。

接着，平板与二抗孵育。

这种带有酶的抗体与高亲和力的抗原-抗体复合物结合。

e实验原理

样品孵育时间结束后,马上甩去孔内液体.如多块酶标板需同时洗涤,可先将板内液体甩去,倒扣于吸水纸上,再依次进行洗涤.使用洗板机洗涤时,建议洗涤次数增加一次.未用完的洗涤液可在4℃-8℃下密封保存1月.

e实验原理如下：

使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。

将抗体包被于微孔板中，加入无关蛋白载体封闭未结合位点，加入标准品和生物素标记的抗原物质进行竞争结合。

做实验的注意事项：

1、实验前的准备工作很重要，试验前要准备充分，拿到任务应当进行简单的思考，将试验需要的各种试剂、试液、仪器以及试验的流程、注意事项、以前试验当中遇到的问题等想清楚，准备好，免得到时少东少西，自乱阵脚。

2、保持实验室整洁。做完实验做到品归位，用过的仪器等恢复原样，不能做到哪里摊到哪里，永远把你的实验台面保持干净，不但是为了让你得到很好的结果，更是为了你自己的心情做实验不能做到整洁。实验时养成隋手清理目前做多的方式是采用pH9.6的碳酸盐缓冲液包被，4℃过夜包被或者37℃包被2h，包被的最适浓度随固相载体和包被物的性质变化，一般蛋白质的包被浓度为1-5ug/ml，要明确针对特定包被抗原的最适包被浓度需要通过实验来确定。的习惯。

3、消煮后的原液做完后不要急着倒掉，等数据算出再倒掉，这样遇异常数据或超标数据，不用重复消煮就可以复检。

elisa实验原理是什么？

交连后的酶根底物可以进行反应，催化分解，5）坐标纸上横轴从左至右个1-9表示为个10进位，第二个1-9表示为第二个10进位。第三个1-9表示为第三个10进位。也就是说，如果个1代表1ng/ml，则第二个1代表10ng/ml，第三个1代表100ng/ml。因为本次实验标准曲线范围是从0.1ng/ml到25.6ng/ml，则可以用个1代表0.1ng/ml，第二个1代表1ng/ml，第三个1代表10ng/ml。使其产生有色物质。根据有色物质的多少和颜色深浅通过酶测曲线得出结论。elisa是用血清来检测的，由数值来判断是阴性还是阳性的结果。

特点：

四、适用血清、血浆、组织匀7.终止及读数.浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型；

五、节省实验经费。

以上内容参考：

elisa结果怎么分析

2.分析个体动物抗体水平达到明显高于对照组的时间异，用方分析先看总体上有无异，然后两比较，看出现异的每对之间是否由于一些相同的因素而导致了异的出现，如年龄、性别、体重。

elisa试剂盒结果分析步骤：1.不同时期抗体水平的变化（OD值），即对照组与实验组有无区别（统计学上的区别）。

3.影响抗体产生的因素很多，如注射的部位、注射时的情况（准确与与否，量的多少等）、有无使用佐剂、佐剂的配制好坏、免疫的频率、动物的健康状况等均可影响抗体的产生，细致的分析需要做好这些详细的记录，这样标准点 浓度 OD1 OD2 OD均 结合率在后面的分析当中才能排除一些技术上的因素，随机误等，真正的分析出动物怎样的本身性质因素导致了抗体的产生异。