rna逆转录成dna单链还是双 rna逆转录得到的dna叫什么

2025-01-05 10:22 - 立有生活网

RNA逆转录的具体过程是怎样的? 是先转出互补的RNA链,还是先转出DNA?

更正一下tchxb的:

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先转出与RNA互补的DNA单链,后转出双链DNA

RNA首先反转录成cDNA(负链DNA),构成RNA-DNA中间体.中间体中的RNA再经过RNA酶H水解,而以剩下的负链DNA成双股DNA.

tchxb的基本上是对的.

RNA逆转录时为什么不需要DNA聚合酶?不是单链变成双链吗?

- =,它是合成出来一个RNA-DNA杂化双链,这种逆转录比较特殊所以用逆转录酶就可以合成DNA单链了,之后DNA再去才需要DNA聚合酶

用的是逆转录酶,它可以是脱氧核苷酸结合上RNA链。DNA聚合酶是使核苷酸结合在DNA上。两个是不一样的

DNA聚合酶以DNA为模板,你现在只有RNA,当然先逆转录

RNA反转录的cDNA是单链的还是双链的

RNA反转录的cDNA是单链的还是双链的

是单链cDNA,想合成双链cDNA需要另外作:

一、cDNA第二链的合成:

1. 链反应完成后,取2ul一链产物-20℃冰箱中保存,待电泳检测。其余的产物合并,混匀,然后顺序加入下列试剂(promega):

20ul 10×DNA Polymerase I buffer

6ul 10mM dNTP(自己配制)

xul dd H2O

1ul RNase H(2U/ul)

10ul DNA Polymerase I(10U/ul)

总体系为200ul;

2. 混匀后,16℃反应2.5小时;

3. 70℃灭活10分钟;

4. 反应完成后,得到200ul cDNA第二链反应体系,将此体系置于冰上;

5.取2ul二链产物,同保存的一链产物一起电泳鉴定。同时上1kb ladder,确定双链的大小范围。

注:一链,二链的电泳图是ear,且二链稍比一链大一些。

二、双链cDNA末端补平:

1. 在第二链反应体系中,顺序加入下列试剂(promega):

6ul 10mM dNTP

2ul T4 DNA Polymerase(8.7U/ul)

2ul BSA(10mg/ml)

2. 稍微离心混匀反应物, 37℃反应至少30分钟,然后75℃灭活10分钟;

3. 加入等体积酚//,剧烈振荡后,常温下13000g离心5分钟;

4. 离心后,吸取上清于另一1.5ml eppendof管中,加入等体积,上下颠倒几次混匀后,常温下13000g离心5分钟;

5. 吸取上清至另一eppendof管,加入1/10V3M NaAc(PH5.2)和2.5V预冷的,混匀,-20℃放置过夜以沉淀双链cDNA;

6. 第二日,将昨日沉淀物在4℃,13000g离心60分钟以充分沉淀双链cDNA;

7.离心完毕,弃上清,加入1ml 70%乙醇洗涤沉淀,常温下13000g离心5分钟;

8.离心完毕,弃上清,干燥沉淀至无乙醇气味.

注:第3,第4步可以用PCR 纯化试剂盒代替。

PCR纯化试剂盒作流程:

1.溶液PE使用前应加入适量体积95%-100%的乙醇,混匀。

2.向200ul二链补平产物中加入5倍体积的buffer PB,混匀。

3.加入spin column中,13000rpm离心1min。

4.加入0.75ml buffer PE,13000rpm离心1min。

5.13000rpm,再离心1min。

6.将spin column放入一新的离心管中,加入50ul buffer EB,静置10min。

7.13000rpm离心2min。

8.加入30ul buffer EB,静置10min。

9.13000rpm离心2min。

10.加入1/10体积3M的NaAc,2.5倍体积,混匀,-20℃沉淀过夜。

RNA逆转录生成的是双链DNA吗?为什么?

一般条件下是的。因为反转录酶的酶活性的多样性。主要是因为拥有DNA知道的DNA聚合酶的活性。

大多数反转录酶都具有多种酶活性,主要包括以下几种活性。

①DNA聚合酶活性;

②RNase H活性;

③DNA指导的DNA聚合酶活性;以反转录合成的条DNA单链为模板,以dNTP为底物,再合成第二条DNA分子。

除此之外,有些逆转录酶还有DNA内切酶活性,这可能与基因整合到宿主细胞染色体DNA中有关。

一般条件下是的。因为反转录酶的酶活性的多样性。主要是因为拥有DNA知道的DNA聚合酶的活性。

大多数反转录酶都具有多种酶活性,主要包括以下几种活性。

①DNA聚合酶活性;

②RNase H活性;

③DNA指导的DNA聚合酶活性;以反转录合成的条DNA单链为模板,以dNTP为底物,再合成第二条DNA分子。

除此之外,有些逆转录酶还有DNA内切酶活性,这可能与基因整合到宿主细胞染色体DNA中有关。

逆转录(rrse transcription)是以RNA为模板合成DNA的过程,即RNA指导下的DNA合成。此过程中,合成与转录(DNA到RNA)过程与遗传信息的流动方向(RNA到DNA)相反,故称为逆转录。逆转录过程是RNA的形式之一,需逆转录酶的催化。 逆转录过程的揭示是分子生物学研究中的重大发现,是对中心法则的重要修正和补充。人们通过体外模拟该过程,以样本中提取的mRNA为模板,在逆转录酶的作用下,合成出互补的cDNA,构建cDNA文库,并从中筛选特异的目的基因。该方法已成为基因工程技术中常用的获得目的基因的策略之一。(来源于百度百科)

所以得到是单链DNA。如果要得到双链的DNA还需加入DNA聚合酶。

RNA逆转录生成的是RNA-DNA双链,因为逆转录必须以RNA自身为模板,所以两条链中一条是DNA,一条是RNA。

是RNA逆转录是以RNA为模板,合成一条DNA单链后再以这条单链为模板合成双链

RNA逆转录生成的是双链DNA吗?为什么?

一般条件下是的。因为反转录酶的酶活性的多样性。主要是因为拥有DNA知道的DNA聚合酶的活性。

大多数反转录酶都具有多种酶活性,主要包括以下几种活性。

①DNA聚合酶活性;

②RNase H活性;

③DNA指导的DNA聚合酶活性;以反转录合成的条DNA单链为模板,以dNTP为底物,再合成第二条DNA分子。

除此之外,有些逆转录酶还有DNA内切酶活性,这可能与基因整合到宿主细胞染色体DNA中有关。

RNA如何逆转录成DNA?

一般都叫RT,加入逆转录酶,dNTP和特定的buffer,然后加mRNA,在酶的作用下,会由单链的RNA变成双链DNA,又叫cDNA, 要看反应过程的话去看看书,教科书上很清楚的一般。实验的话去看看公司的逆转录试剂盒说明书,也很明白的。

有逆转录酶啊 单链的RNA逆转录为单链的DNA 这个一般是才有如此特殊的特性

反转录:以RNA为模板,通过反转录酶,合成DNA的过程

这个过程要有逆转录酶,单链的RNA逆转录为单链的DNA

生物.讲一下RNA逆转录过程

在逆转录酶作用下以dNTP为底物,RNA为模板,tRNA为引物,按5′→3′方向,合成一条与RNA模板互补的DNA单链,它与RNA模板形成RNA DNA杂交体.随后又在反转录酶的作用下,水解掉RNA链,再以此DNA为模板合成第二条DNA

在逆转录酶作用下,以RNA为模板合成的DNA是双链的还是单链的?

以RNA为模板合成的DNA是cDNA这是 出现的是DNA与RNA杂交的状态,这时候逆转录酶还有一个活性就是将这个杂交的双链中的RNA降解掉,同样是逆转录酶的另一个活性一这个DNA为模板另一条链……这时就是cDNA双链啦

所以逆转录酶有三个活性哦

也就是说在逆转录酶脱下来的时候 形成的是一条cDNA双链

简单的说,RNA为模板先合成的DNA的一条单链,之后单链再成双链~

DNA只有双链,没有单链

以RNA为模板合成该RNA的互补练,即单链

反转录:以RNA为模板,通过反转录酶,合成DNA的过程

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